Psikostimulanlarla komplekslerde doğal serotonin taşıyıcısının yapıları ve membran etkileşimleri
Serotonin taşıyıcı (SERT), presinaptik sinir terminallerinde serotonin geri alımına aracılık eden SLC6 nörotransmiter taşıyıcı ailesinin bir üyesidir. SERT, hem terapötik antidepresan ilaçların hem de serotonin taşınmasına müdahale ederek normal serotonerjik iletimi bozan küçük moleküller olan kokain ve metamfetaminler gibi yasa dışı psikostimülan maddelerin hedefidir. Onlarca yıllık çalışmalara rağmen, doğal SERT’nin oligomerizasyon durumu ve bunun potansiyel proteinlerle etkileşimleri gibi SERT’nin önemli fonksiyonel yönleri hala çözülmemiştir. Burada hafif, iyonik olmayan bir deterjan kullanarak SERT’yi domuz beyninden (pSERT) izole etmek için yöntemler geliştiriyoruz, oligomerizasyon durumunu ve diğer proteinlerle etkileşimlerini araştırmak için floresans algılama boyutu dışlama kromatografisinden yararlanıyoruz ve tek parçacık kriyo-elektron mikroskobu kullanıyoruz metamfetamin veya kokain içeren komplekslerdeki pSERT yapılarını aydınlatmak, psikostimülan tanıma ve eşlik eden pSERT konformasyonlarına ilişkin yapısal içgörüler sağlamak. Metamfetamin ve kokainin her ikisi de SERT merkezi bölgesine bağlanarak taşıyıcıyı dışa doğru açık bir konformasyonda stabilize eder. Ayrıca, çoklu kolesterol veya kolesteril hemisüksinat (CHS) moleküllerinin yanı sıra SERT allosterik bölgesine bağlı bir deterjan molekülüne atfedilebilen yoğunlukları da belirledik. İzolasyon koşullarımız altında, pSERT’nin en iyi monomerik bir varlık olarak tanımlandığını, etkileşime giren proteinler olmadan izole edildiğini ve çoklu kolesterol veya CHS molekülleri tarafından çevrelendiğini bulduk.
