Nöronal mitokondriyal morfoloji, perfüzyon sırasında hem fiksatif hem de oksijen seviyesinden önemli ölçüde etkilenir.
Beyindeki nöronlar, çoklu dendritlerden ve bir hücre gövdesinden üretilen tek bir aksondan oluşan benzersiz şekilde polarize bir yapıya sahiptir. İlginç bir şekilde, hücre içi mitokondri de dendritler ve aksonlar boyunca çarpıcı biçimde polarize morfolojiler gösterir: kortikal piramidal nöronlarda (PN’ler) dendritik mitokondri uzun ve tübüler bir şekle sahipken, aksonal mitokondri küçük ve daireseldir. Mitokondri, ATP üreterek ve kalsiyumu tamponlayarak nöronun her bölmesinde önemli roller oynar, böylece sinaptik iletimi ve nöronal gelişimi etkiler. Ek olarak, mitokondriyal şekil ve dolayısıyla işlev, oksidatif stres gibi çevresel stresler tarafından veya Alzheimer hastalığı ve Parkinson hastalığı dahil olmak üzere çeşitli nörodejeneratif hastalıklarda dinamik olarak değiştirilir. Değişen mitokondriyal şeklin önemi birçok çalışma tarafından iddia edilmiş olsa da, bu strese duyarlı organeli incelemek için yöntemler standardize edilmemiştir. Burada deneysel işlemler sırasında mitokondriyal morfolojiyi etkileyen ilgili adımları ele alıyoruz. Yalnızca paraformaldehit (PFA) içeren veya prosedür sırasında hipoksik koşullara neden olan fiksatif çözeltilerin, hem in vitro hem de in vivo olarak mitokondrinin dramatik parçalanmasına neden olduğunu gösterdik. Sırasıyla glutaraldehit ilavesi veya oksijen takviyesi kullanımından sonra bu bozulma gözlenmedi. Son olarak, önceden oluşturulmuş fibril a-sinüklein ile muamele edilmiş nöronları kullanarak, numuneler PFA/glutaraldehit veya PFA/sükroz içeren solüsyonlarla sabitlendiğinde, ancak tek başına PFA ile sabitlenmediğinde mitokondriyal morfoloji arasında bir fark gösteririz. Çalışmamız, nöronlarda mitokondriyal morfolojiyi incelemek için optimize edilmiş yöntemler sağlar ve fizyolojik ve nörodejeneratif hastalık modellerinde mitokondriyi içeren altta yatan hücresel mekanizmaları araştırırken fiksasyon koşullarının kritik olduğunu gösterir.
