Çalışmalar

İn vivo yakınlık ligasyonu, Neurexin’in hücre içi alanının endojen aday etkileşimcilerini ortaya çıkarır

Neureksinler, hücre dışı alanları aracılığıyla bir dizi partnere bağlanan yüksek oranda eklenmiş transmembran hücre yapışma molekülleridir. Bununla birlikte, neurexin’in büyük ölçüde değişmeyen hücre içi alanının aşağısındaki sinyal yolları hakkında çok daha az şey bilinmektedir. C. elegans, daha önce sinaptik birleşme ve stabilizasyon için gerekli olduğunu gösterdiğimiz tek bir neurexin geni içerir. Neurexin’in presinaptik işlevlerine aracılık eden sinyal yolları hakkında fikir edinmek için, neurexin’in hücre içi alanını, bir yakınlık ligasyon yöntemi olan TurboID ile endojen olarak etiketledik ve streptavidin aşağı çekme ve kütle spektrometrisi ile bitişik biyotinlenmiş proteinleri izole etmemize izin verdik. Deneysel türümüzü, hala TurboID ile etiketlenmiş, ancak neurexin’in PDZ-bağlama motifinin endojen olarak silindiği ve presinaptik aktif bölgelerden ayrılmasına yol açan neurexin içeren bir kontrol türüyle karşılaştırdık. Bu yaklaşımı kullanarak, aktif bölge yapı iskeleleri, aktin bağlayıcı proteinler, sinyal molekülleri ve diğerleri arasında RNA kaçakçılığı, protein sentezi ve bozunma aracıları dahil, neurexin’in hem bilinen hem de yeni hücre içi etkileşimcilerini belirledik. Aday neurexin etkileşimcileri için mutantların karakterizasyonu, nrx-1 mutant fenotipinin yönlerini özetlediklerini ortaya çıkardı, bu da neurexin sinyallemesinde yer alabileceklerini düşündürdü.

Yazının devamına buradan ulaşabilirsiniz

İlgili Makaleler

Başa dön tuşu